Rostliny rostou dobře na slunci nebo v polostínu, ale kvetou lépe, když jsou na slunečném místě. Dobře roste na letní louce a je užitečnou rostlinou pro přitahování hmyzu.Žlutý třezalka nemá rád jílovité, kyselé a alkalické půdy, nejlépe se cítí v černozemi a písčitých půdách. Roste také dobře v mírně úrodných půdách.
Setí žlutého třezalka se doporučuje provést na začátku jara. Je důležité udržovat vzdálenost mezi řádky 40–45 cm. Semena se kladou na povrch, bez zahrabávání. Posypou se trochou zeminy nebo pískem a zalévají.
Semena začínají klíčit při teplotě 5–6 °C. Optimální teplota pro tuto kulturu je 20–25 °C.
